常溫細胞收貨當天應該怎么處理？

1. 收到常溫細胞后，請立即拍照記錄包裝是否完好、有無漏液或瓶身破損。

2. 在顯微鏡下觀察細胞是否存在微生物污染，并拍攝不同倍數下的細胞狀態及染菌情況，以便后續售后處理。

3. 消毒瓶身后，更換為贈送的完全培養基，隨后放入培養箱靜置2–3小時。如發現較多細胞懸浮，需離心收集并重新接種至培養瓶。

4. 觀察細胞密度：

   · 若密度超過80%，可進行正常傳代處理（部分原代細胞不可傳代，請根據實際情況判斷）。首次傳代推薦比例為1:2至1:3（具體比例視實際細胞密度而定，如不確定請聯系技術支持）。

   · 若密度未達80%，可繼續培養，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋；懸浮細胞需離心全部培養基以收集細胞。

5. 如因氣溫或運輸等原因導致貼壁細胞漂浮，請離心收集細胞后，在離心管中進行消化傳代（參考附件），或及時聯系技術支持獲取指導。

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貼壁細胞傳代步驟

1. 吸棄原有細胞培養基。

2. 沿貼壁細胞層對側加入沖洗液，避免擾動細胞層，輕輕搖晃容器數次。

3. 吸棄沖洗液，加入預熱的胰酶（例如T25培養瓶加入1ml），確保胰酶覆蓋細胞層。

4. 室溫孵育約2分鐘（具體時間因細胞系而異）。

5. 顯微鏡下觀察細胞解離情況，若未達90%可適當延長孵育時間，每30秒檢查一次。

6. 當細胞解離程度≥90%時，傾斜容器使液體流盡，加入兩倍體積預熱的完全培養基，吹打細胞層表面使細胞分散。

7. 將細胞轉移至15mL無菌離心管，以200×g離心3–5分鐘（具體參數視細胞種類調整）。

8. 用少量預熱完全培養基重懸細胞沉淀，按推薦比例稀釋后接種至新培養容器，并放入培養箱。如使用普通培養瓶，需旋松瓶蓋以保證氣體交換（透氣瓶蓋除外）。

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懸浮細胞傳代步驟

1. 收集T25培養瓶中的細胞懸液至離心管，1000rpm離心5分鐘。

2. 棄上清，加入1–2ml完全培養基重懸細胞。

3. 按1:2比例傳代至新T25培養瓶，并補充5–8ml新鮮完全培養基。

4. 將培養瓶放入細胞培養箱繼續培養。